مقاله

آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین-۱ انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان e.coli

قاسم براتی، ghasem barati حسن میرزاحسینی، hasan mirza hosseini جمشید کریمی، jamshid karimi فاطمه ابراهیم زاده، fatemeh ebrahimzadeh نوشین شباب، nooshin shabab مسعود سعیدی جم، masoud saidijam

چکیده

مقدمه و هدف: آنتاگونیست رسپتور (il-1ra) il - 1 یک سایتوکاین ضد التهابی قوی است که باعث محدود کردن اثرات التهابی مربوط به اینترلوکین-1 (il-1) می شود. بعلت تشابه ساختمانی با il-1ra، il-1 به طور رقابتی به رسپتور il-1 متصل می شود ولی هیچ سیگنالی را القا نمی کند. بنابراین در درمان افراد مبتلا به بیماری های التهابی نظیر آرتریت روماتوئید بکار می رود. هدف از مطالعه حاضر کلون کردن، بیان و بهینه سازی بیان این پروتئین در e. coli می باشد. روش کار: دراین مطالعه تجربی قطعه ی ژنی سنتزی مربوط به il-1ra به وسیله pcr تکثیر داده شد. پس از برش دو آنزیمی، این قطعه در وکتور بیانی pet28a کلون گردید. بیان ژن مورد نظر ابتدا در سطح mrna به روش rt-pcr و سپس در سطح پروتئین به روش sds-page مورد برسی قرار گرفت و برای تایید پروتئین بیان شده از وسترن بلات استفاده گردید. بهینه سازی بیان نیز در غلظت های مختلف iptg و مدت زمان های مختلف بعد از القاء صورت گرفت. نتایج: به کمک روش کلنی-pcr و هضم دو آنزیمی، کلون شدن قطعه ی ژنی مورد نظر در وکتور بیانی pet28a مشخص شد. رونویسی از ژن کلون شده و بیان بالای پروتئین نوترکیب به ترتیب به روش rt-pcr و sds-page مشاهده شد. نتیجه ی حاصل از الکتروفورز پروتئین نیز با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان بیان در غلظت های مختلف القاءکننده و مدت زمان پس از القاء بهینه سازی گردید. نتیجه نهایی: نتایج حاصل از مطالعه نشان دهنده ی بیان بالای این پروتئین در میزبانe.coli به وسیله وکتور بیانی pet28a بود. این مطالعه هم چنین نشان داد رابطه مستقیمی با افزایش بیان و مدت زمان برداشت سلول ها پس از القاء وجود دارد، لذا القاء با غلظت 1 میلی مولار iptg به مدت یک شب برای بیان بالای پروتئین پیشنهاد می گردد.

اسناد مشابه

  • آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین-1 انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان E.coli

    مقاله۲۰۱۴مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی همدانقاسم براتی، حسن میرزاحسینی، جمشید کریمی، فاطمه ابراهیم زاده

    مقدمه و هدف: آنتاگونیست رسپتور (IL-1Ra) IL - 1 یک سایتوکاین ضد التهابی قوی است که باعث محدود کردن اثرات التهابی مربوط به اینترلوکین-1 (IL-1) می شود. بعلت تشابه ساختمانی با IL-1Ra، IL-1 به طور رقابتی به رسپتور IL-1 متصل می شود ولی هیچ سیگنالی را القا نمی کند. بنابراین در درمان افر

  • کلونینگ و بهینه سازی کدون ژن فنیل آلانین دهیدروژناز در سیستم بیانی e.coli و مقایسه بیان ژن با دو پروموتور t۷ و λpr

    مقالهپژوهش در پزشکیسعید حیدری کشل، saeed heidari-keshel student research committee, proteomics research center, faculty of paramedical sciences, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran,department of tissue engineering, faculty of advanced medical technologies, tehran university of medical sciences, tehran, iranمرکز تحقیقات پروتئومیکس، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی , واحد فراهم آوری سلول های بنیادی، مرکز تحقیقات چشم، بیمارستان فارابی، دانشگاه علوم پزشکی تهران صنم زندیان، sanam zandian department of pharmacognosy, faculty of pharmacy, shiraz university of medical sciences, shiraz, iranدانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز فریبا قاسم وند، fariba ghasemvand enzyme technology laboratory, biochemistry department, pasteur institute of iran, tehran, iranآزمایشگاه تکنولوژی آنزیم، گروه بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران سعید رحمان زاده

    چکیده سابقه و هدف: یکی از کاربردهای پزشکی آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز، تعیین مقدار دقیق سطح l- فنیل آلانین در سرم خون افراد جهت شناسایی بیماران مبتلا به بیماری فنیل کتونوریا می باشد. در این مطالعه، میزان بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون ژنی (pdh ) در دو ناقل بیانی pe

  • کلونینگ و بهینه سازی کدون ژن فنیل آلانین دهیدروژناز در سیستم بیانی E.coli و مقایسه بیان ژن با دو پروموتور T7 و λPR

    مقاله۲۰۱۴پژوهش در پزشکیسعید حیدری کشل، صنم زندیان، فریبا قاسم وند، سعید رحمان زاده

    سابقه و هدف: یکی از کاربردهای پزشکی آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز، تعیین مقدار دقیق سطح L- فنیل آلانین در سرم خون افراد جهت شناسایی بیماران مبتلا به بیماری فنیل کتونوریا می‌باشد. در این مطالعه، میزان بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون ژنی (pdh ) در دو ناقل بیانی pET-23a

  • کلونینگ و بیان آنتاگونیست گیرنده‌ی اینترلوکین 1 نوترکیب انسانی در سیستم‌های بیانی Escherichia coli شامل (DE3) Bl21، (DE3) Origami و (DE3) Rosetta

    مقاله۲۰۱۹مجله دانشکده پزشکی اصفهانهانیه فردگلی، سید نظام‌الدین حسینی، ستاره حقیقت

    مقدمه: آنتاگونیست گیرنده‌ی اینترلوکین 1 (IL-1RA)، پروتئینی 153 آمینواسیدی (با وزن مولکولی 83/16 کیلودالتون) است. این پروتئین دارویی، با نام تجاری آناکینرا شناخته‌شده است و کاربرد مؤثری در درمان آرتریت روماتوئید دارد. این مطالعه، به‌منظور بررسی بیان پروتئین نوترکیب آنتاگونیست گیرن

  • کلونینگ، بیان و بهینه سازی محیط جهت بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلی مورفا

    مقالهکومشمحمدتقی برجیان بروجنی، mohammadtaghy borjian borujeni nanobiotechnology laboratory, dept. of biotechnology, faculty of energy engineering and new technologies, shahid beheshti university, tehran, iran1- دانشگاه شهید بهشتی، دانشکده ی مهندسی انرژی و فناوری های نوین، گروه بیوتکنولوژی، آزمایشگاه نانوبیوتکنولوژی امید رعنایی سیادت، omid ranaei siadat nanobiotechnology laboratory, dept. of biotechnology, faculty of energy engineering and new technologies, shahid beheshti university, tehran, iran1- دانشگاه شهید بهشتی، دانشکده ی مهندسی انرژی و فناوری های نوین، گروه بیوتکنولوژی، آزمایشگاه نانوبیوتکنولوژی جواد هراتی، javad harati nanobiotechnology laboratory, dept. of biotechnology, faculty of energy engineering and new technologies, shahid beheshti university, tehran, iran1- دانشگاه شهید بهشتی، دانشکده ی مهندسی انرژی و فناوری های نوین، گروه بیوتکنولوژی، آزمایشگاه نانوبیوتکنولوژی فرناز نیکزاد جمنانی

    سابقه و هدف: آنزیم فیتاز توانایی تبدیل فیتیک اسید به میواینوزیتول و فسفات معدنی را دارا می باشد؛ از این رو به صورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی در غذای حیوانات تک معده ای اضافه می گردد. هدف این تحقیق، کلونینگ، بیان و بهینه سازی محیط برای بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبا

  • بهینه سازی بیان سازه پلی توپیک حاوی ژن های e۶ و e۷ ویروس پاپیلومای انسانی در میزبان بیانی اشرشیاکلی

    مقالهمجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تهرانآرین رحیمی، arian rahimi department of sciences, islamic azad university of urmia, urmia, iran.گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه، آرش آرش کیا، arash arashkia department of virology, pasteur institute of iran, tehran, iran.گروه ویروس شناسی، انستیتو پاستور ایران امیر میرزایی، amir mirzaie young researchers club and the elite of tehran east, islamic azad university, tehran, iran.باشگاه پژوهشگران جوان و نخبگان، واحد تهران شرق، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران حسن نوربازرگان

    زمینه و هدف: ویروس پاپیلومای انسانی (hpv) یکی از شایع ترین ویروس هایی است که در ایجاد سرطان دهانه رحم نقش دارد و پژوهش ها نشان داده است که در بیشتر موارد سرطان دهانه رحم، پروتیین های e6 و e7 ویروس پاپیلوما وجود دارد. هدف از مطالعه کنونی بهینه سازی بیان سازه پلی توپیک حاوی ژن های