همسانه سازی ژن تروپینون ردوکتاز -tr-i) i) در باکتری e. coli
چکیده
آلکالوئید های گیاهی گروه های بزرگی از تولیدات طبیعی را تشکیل می دهند، که ترکیبات فعال دارویی فراوانی را مهیا می سازند. ریشه های برخی از گیاهان خانواده سولاناسه توانایی تولید آلکالوئیدهای تروپانی (hyoscyamus niger) مانند گیاه بنگدانه (solanaceae) مانند هیوسیامین و اسکوپولامین را دارند. این دو آلکالوئید عمدتاً در سلول های ریشه های کامبیون جوان تولید می شوند. آن ه ا عمدت اً بدلیل تأثیر رو ی سیستم عصبی پاراسمپاتیک ، داروهای مهمی بشمار می آیند. ژن های زیادی در مسیرهای بیوسنتز تروپان آلکالوئیدها مطالعه شده اند که همسانه سازی ژن و مهندسی متابولیک این آلکالوئیدها را ممکن می سازند. در این بررسی به منظور تهیه ساز واره عامل تولید هیوسیامین از طریق مهندسی ژنتیک، همسانه سازی شد . برای e. coli جداسازی و در باکتری i ژن کد کننده آنزیم تروپینون رداکتاز استخراج و in vitro تحت شرایط h. niger کل از ریشه های کشت شده rna این منظور نخست با استفاده از آغازگرهای pcr ژن هدف از طریق واکنش ،rt- pcr پس از انجام واکنش با این ژن bamhi در جایگاه برشی آنزیم محدودگر puc اختصاصی تکثیر گردید. سپس ناقل 19 توسط ناقل نوترکیب ترانسفورم گردید . پس از dh5? سویه e. coli نوترکیب شده و باکتری انتخاب کشت باکتری های تراریخت، پلازمید از آن ها استخراج و درستی همسانه سازی بوسیله تأیید شد. در مطالعه همردیف سازی توالی ژن هدف و اسید آمینه تخمینی pcr هضم آنزیمی و به ترتیب به میزان 95 % و 91 % مشابهت مشاهده گردید. ncbi آن با اطلاعات موجود در