پایان‌نامه

تهیه آنتی بادی های نوترکیب منوکلونال علیه شبه قارچ polymyxa betae

حسین صفرپور

چکیده

بیماری رایزومانیا یکی از مخربترین بیماری های ویروسی چغندر قند است. در این بیماری عملکرد کمی و کیفی چغندرقند تحت تاثیر قرار می گیرد. انتقال طبیعی عامل این بیماری توسط شبه قارچ polymyxa betaeصورت می پذیرد. اسپورهای استراحتی این شبه قارچ سال های زیادی می توانند در مزرعه آلوده زنده بمانند. به منظور ارزیابی کمی شبه قارچ p.betae در خاک و بافت آلوده، تهیه آنتی بادی های اختصاصی ضروری می باشد. پروتئین گلوتاتیون- اِس- ترانسفراز که در تمامی حالت های مورفولوژیکی p. betae وجود دارد می تواند به عنوان یک گزینه مناسب برای شناسایی این شبه قارچ در روش سرولوژیکی باشد.به این منظور ابتدا باکتری اشریشیاکلی توسط ناقل بیانی حاوی ژن gst تراریخته و بیان پروتئین به صورت انبوه انجام شد. خالص سازی پروتئین نوترکیب gst با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی بر روی ستون نیکل صورت پذیرفت. پروتئین خالص gst در ایمونوتیوب ثابت گردید و پس از بلوکه شدن فضاهای خالی توسط شیر بدون چربی2% ، ذرات فاژ به لوله افزوده و فاژهای غیر اختصاصی آنها حذف شدند. فاژهای اختصاصی متصل به تیوب، جداسازی شده و برای تکثیر وارد سلول های در حال رشد باکتری اشریشیاکلی سویه tg1 شدند. فاژهای تکثیر یافته دوباره جدا سازی شده و برای افزایش ذرات اختصاصی دارای قابلیت اتصال به پروتئین gst سیکل فوق تکرار می شود. پس از انجام سه دور چرخه فوق، در حدود 100 عدد تک کلونی دارای فاژهای جداسازی شده انتخاب و به صورت جداگانه کشت شده و جهت تولید scfv مربوطه با iptg تحریک شدند. scfv تولید شده در باکتری وارد محیط کشت گردیده و پس از جداسازی با سانتریفیوژ برای تست الیزا و شناسایی کلون های اختصاصی مورد استفاده قرار گرفتند. کلون های مولد scfv اختصاصی جداسازی و برای تعیین تنوع با روش های rflp و تعیین ترادف مورد بررسی قرار گرفتند. آنالیزهای تکمیلی وسترن بلاتینگ و الیزا بر روی scfv های اختصاصی منفرد و با استفاده از عصاره های سالم و آلوده چغندرقند انجام شدند. برای خالص سازی و تولید انبوه آنتی بادی های نوترکیب، سویه باکتریایی hb2151 و یا bl21-de3 با پلاسمیدهای phen حامل ژن های scfv اختصاصی تراریخته شدند. باکتری تراریخته در محیط کشت lb حاوی آنتی بیوتیک آمپی سیلین در 37 درجه سانتیگراد رشد یافته و هنگامی که od محیط کشت به عدد یک رسید، iptg استریل به کشت باکتریایی تا غلظت یک میلی مولار افزوده شد و کشت در دمای30 درجه سانتیگراد ادامه یافت. پس از سه ساعت سلول های باکتریایی با سانتریفیوژ جداسازی و scfv تجمع یافته در فضای پیش پلاسمایی با روش شوک اسمزی جدا گردید. در این تحقیق در نهایت آنتی بادی مونوکلونالی تولید شد که بر اساس نتایج آزمون های الیزا، وسترن بلاتینگ و دیبا به خوبی قادر به شناسایی و تفکیک نمونه های سالم و آلوده به شبه قارچ p. betae هستند.

اساتید راهنما و مشاور

محمدرضا صفرنژاد، آیت اله سعیدی زاده

شکل‌ها (۲)

  • شکل، صفحه‌ی ۲
    صفحه‌ی ۲
  • شکل، صفحه‌ی ۴
    صفحه‌ی ۴

شکل‌ها از متن کامل مقاله برداشته شده‌اند و حقوقشان از آنِ نویسندگان و ناشر است.

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • بیش بیان و تخلیص نانوبادی های نوترکیب و تهیه آنتی بادی ثانویه کونژوگه علیه آنها

    مقالهپژوهش های آسیب شناسی زیستیfatemeh rahbarizadeh، department of medical biotechnology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, i.r. iran vahid khoddami vishteh، department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, i.r. iran davood ahmadvand، department of clinical biochemistry, school of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, i.r. iran

    هدف: قطعه متصل شونده به آنتی ژن از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری به صورت یک تک دومن(vhh )می باشند. ساختار کریستالی یک vhh خالص نشان داده است که این مولکول در حدود5/2 نانومتر قطر و کمتر از 4 نانومتر طول دارد. به همین علت به این مولکول نانوبادی گفته می شود. شباهت زیاد این مولکوله

  • تهیه آنتی بادی پلی کلونال علیه پروتئین فعال کننده ی سلول های B

    مقاله۲۰۲۳مجله فیزیولوژی و فارماکولوژی ایرانرسول مردانی جونقانی، شیوا ایرانی، مهدی حبیبی انبوهی، مهدی بهدانی

    زمینه و هدف: پروتئین فعالکنندهی سلولهای B( BAFF )عضوی مهم از خانوادهی فاکتور نکروزدهنده تومورها میباشد. بیان بیش از اندازهی این پروتئین در برخی بیماریهای خودایمنی و سرطانها مشاهده شده است بنابراین این پروتئین میتواند بهعنوان یک نشانگر تشخیصی و نیز یک هدف درمانی احتمالی مورد استفا

  • استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

    مقاله۲۰۱۲شیمی آلی و پلیمرحسین صفرپور، سعید عطایی کچویی، سعید نظری، سید باقر محمودی

    بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه،

  • استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

    مقاله۲۰۱۲زیست فناوری گیاهان زراعیمحمدرضا صفرنژاد، مرضیه بصیرت، محمدعلی ابراهیمی، حسین صفرپور

    بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عامل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شن

  • ارزیابی میزان آنتی بادی اختصاصی بر علیه آنتی ژن نوترکیب esat-۶ مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در تشخیص توبرکلوزیس گاوی

    مقالهدانش و تندرستیroghaieh aghazadeh1 1- dept. of microbiology, pharmaceutical sciences branch, islamic azad university, tehran, iran.، majid tebianian2 2- dept. of biotechnology, razi vaccine and serum research institute, karaj, iran.، mehdi mahdavi3 3- dept. of immunology, pasteur institute of iran, tehran, iran.

    مقدمه: توبرکلوزیس گاوی نوعی بیماری مشترک بین انسان و حیوان است. عامل این بیماری مایکوباکتریوم بوویس می باشد. روش های تشخیص رایج این بیماری شامل سنجش سطح اینترفرون گاما و آزمون جلدی می باشد که هر کدام از آنها معایب خاص خود را دارند اما روش های سرولوژیک مبتنی بر الایزا توانسته اند

  • بیان نوترکیب و تخلیص ناحیه ۱ فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در escherichia coli و تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه آن در موش سوری

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی اراکمهدی رضائی، mehdi rezaee faculty of basic science imam hossein university,tehran ,iranتهران- اتوبان بابایی- دانشگاه جامع امام حسین(ع)- مرکز و گروه علوم زیستی حسین هنری، hosein honari faculty of basic science imam hossein university,tehran ,iranتهران- اتوبان بابایی- دانشگاه جامع امام حسین(ع)- مرکز و گروه علوم زیستیسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (imam hosseyn university) علی محمد زند، ali mohammad zand faculty of basic science imam hossein university,tehran ,iranتهران- اتوبان بابایی- دانشگاه جامع امام حسین(ع)- مرکز و گروه علوم زیستیسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه جامع امام حسین (imam hosseyn university) lمحمد علی عارف پور ترابی

    زمینه و هدف: سیاه‎زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس می‎باشد که آنتی‎ژن حفاظت‎کننده و ناحیه یک فاکتور کشنده (lfd1) ایمونوژن‎های قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شده‎اند.