تهیه نانو بادی نوترکیب مشتق شده از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری بر علیه آنتی ژن نوترکیب psma در سرطان پروستات
چکیده
مقدمه، سرطان پروستات شایع ترین سرطان موجود در مردان می باشد. استفاده از آنتی بادی در درمانهای انتخابی سرطان بسیار مورد توجه است. مهمترین فاکتور در درمان یا تشخیص، یافتن آنتی ژن های اختصاصی سرطان می باشد. آنتی ژن psma با توجه به افزایش آن در سرطان پروستات، گزینه مناسبی جهت آنتی بادی درمانی می باشد. نوع خاصی از آنتی بادی های شتری که vhh نام دارد، با توجه به کوچکی اندازه، دارای مزایای بسیار زیادی در کاربرد های کلینیکی می باشد. پس از تهیه کتابخانه های فاژی حاوی نانو بادی توسط تکنیک نمایش فاژی و غربالگری آنها، نانوبادی اختصاصی با افینیتی بالا بر علیه آنتی ژن مورد نظر به دست می-آید. هدف از این مطالعه طراحی و تولید یک اپی توپ از آنتی ژن psma، تهیه کتابخانه فاژی ایمن حاوی نانوبادی های شتری، غربالگری کتابخانه فاژی بر علیه آنتی ژن psma و در نهایت تولید نانوبادی (vhh) مونوکلونال اختصاصی بر علیه آنتی ژن psma می باشد. روش، آنتی ژن psma پس از کلون و بیان، به شتر تزریق شد. پس از تخلیص لنفوسیت های شتری و جداسازی rna، cdna ساخته شد. با انجام دو واکنش pcr متوالی، ژنهای vhh جدا گردید. ژنهای نانوبادی وارد وکتور فاژمیدی شد و پس از قرار دادن در میزبان مناسب، توسط فاژ کمکی آلوده گردید. بدین ترتیب کتابخانه فاژی حاوی نانوبادی ایجاد شد. این کتابخانه جهت به دست آوردن نانوبادی با افینیتی بالا، 5 مرحله غربالگری شد. پس از انجام فاژ الایزا، چند کلونی انتخاب و نانو بادی به صورت محلول تولید شد. جهت افزایش تولید نانوبادی، ژن vhh وارد وکتور بیانی pet28a شد. در نهایت میزان تمایل و اختصاصیت نانوبادی اندازه گیری شد. نتیجه و بحث، بیان آنتی ژن psma توسط الکتروفورز و وسترن بلات، و ایمن شدن شترها توسط الایزا تایید شد. تکثیر ژنهای vhh توسط الکتروفورز تایید شد. همچنین تایید کتابخانه ژنی توسط واکنش کلونی pcr انجام شد. وجود فاژهای نمایش دهنده نانوبادی نیز توسط الایزا بر علیه psma به تایید رسید. تولید نانوبادی نوترکیب نیز توسط الکتروفورز و وسترن بلات به تایید رسید. میزان تمایل نانوبادی بر علیه psma نوترکیب 8-10 × 7/5 محاسبه گردید. در نهایت با توجه به افینیتی و اختصاصیت بالای نانوبادی تولیدی، میتوان به این محصول به عنوان یک ابزار تشخیصی در سرطان پروستات امیدوار بود.