پایان‌نامه

کلونینگ و تخلیص پروتئین s100a9 از نوتروفیل های پلاسمای انسان و تولید این پروتئین بصورت نوترکیب

فریبا خلیلی

دانلود متن کاملرایگان، با حساب کاربری؛ ثبت نام با گوگل چند ثانیه است

چکیده

چکیده پروتئین های s100، گروهی از پروتئین های سیتوپلاسمی چندژنی می باشند که به یون کلسیم ca2+ متصل می شوند. این پروتئین ها جزء پروتئین های اسیدی کوچک (10-12 کیلودالتونی) هستند که منحصرا در مهره-داران یافت می شوند. بیش از 40 سال پیش نخستین اعضای خانواده پروتئینی کشف و از مغز گاو تخلیص شد. علت نامگذاری این پروتئین به s100 حلالیت100% آنها در محلول سولفات آمونیوم می باشد. اغلب ژنـهای s100 دریک مجموعه ژنی در ناحیــه ای واقع در قطعه 21 بازوی بلند کروموزوم شماره یک ( 1q21 ) انسان قرار دارند. این ناحیه مسئول بسیاری از ناهنجاری های کروموزومی محسوب می شود. یکی از پروتین های خانواده s100 ، پروتئین s100a9 است که یک پروتیئن متصل شونده به یون کلسیم و دارای 113 اسید امینه با وزن مولکولی 13 کیلو دالتون می باشد. این پروتئین از فاگوسیت های فعال شده آزاد می شود و به طور مستقیم سلول های اندوتلیال و فاگوسیت های تک هسته ای و لنفوسیت ها را از طریق بر هم کنش با گیرنده rage و tlr- 4 فعال می کند. پروتئین s100a9 از جمله واسطه های مولکولی مهم در بسیاری از بیماریها از جمله آرتریت التهابی، تصلب شرایین و عفونتهای میکروبی می باشد. s100a8 و s100a9 چون دارای نقش دو گانه ای در خارج و داخل سلول دارند فعالیت خود را به صورت هترو دایمر s100a8/a9 انجام می دهند. هترو دایمر s100a8/a9 دارای عملکرد های ایمونولوژیکی متفاوتی است از جمله : در فعالیتهای وابسته به کلسیم در طی التهاب نقش مهمی دارد. این نقش شامل فعالسازی mac-1 و اینتگرین ?2 می باشد که در اتصال نوتروفیل به سلولهای پوششی شرکت می نماید. دراین تحقیق ، بعد از طراحی پرایمر برای ژن s100a9 ، واکنش pcr برای تکثیر این ژن انجام گرفت. بعد از آن محصول pcr در ناقل بیانی pet-28a+ کلون شد. ناقل نوترکیب به سویه باکتری e.coli bl21de3 انتقال یافته و به وسیله iptg القاء شد. بیان پروتیئن مذکور در سویه باکتری e.coli bl21de3 مورد ارزیابی قرار گرفت و به وسیله واکنش ایمونوبلاتینگ تایید شد. فرآیند بیان با تغییر 3 پارامتر اصلی ( زمان- دما- غلظت iptg) بهینه شد. بهینه سازی نشان داد که میزان بالایی از پروتیئن نوترکیب s100a9 بر روی ژل مشاهده می شود. بهترین شرایط بیان دردمای 37 درجه سانتی گراد ، مدت زمان 12ساعت بعد از غلظت mm /5 از iptg ایجاد می شود درنهایت پروتیئن نوترکیبs100a9 به وسیله ستون نیکل تخلیص شد

اساتید راهنما و مشاور

مطصفی قانعی، مهدی کمالی

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی اراکسمیه کدخدایان، somayeh kadkhodayan department of biology, sciences and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. شیوا ایرانی، shiva irani department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) سید مهدی سادات، seyed mehdi sadat department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran.بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) فاطمه فتوحی

    زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن

    مقاله۲۰۱۷مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانهادی محمد زاده، بهزاد خوانساری نژاد، عبدالرحیم صادقی، حمید ابطحی

    سابقه و هدف: اندازه گیری هورمون متحرک تیروئید (TSH) برای تشخیص و بررسی اختلالات تیروئیدی، بسیار مفید بوده و معمولا از آزمون های RIA و ELISA برای این منظور می شود. با توجه به اینکه زنجیره آلفا بین TSH و سه هورمون گلیکوپروتئینی LH, FSH و CG شباهت ساختمانی زیادی وجود دارد؛ بنابراین،

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون tsh انسانی (tshβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانهادی محمد زاده، hadi mohammadzade department of medical biotechnology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranگروه زیست فناوری پزشکی، دانشکده پزشکی، بهزاد خوانساری نژاد، behzad khansarinejad department of microbiology and immunology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranگروه میکروبشناسی و ایمنیشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران عبدالرحیم صادقی، abdolrahim sadeghi endocrinology and metabolism research center, department of biochemistry, school of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranمرکز تحقیقات غدد و متابولیسم، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران حمید ابطحی

    سابقه و هدف: اندازه گیری هورمون متحرک تیروئید (tsh) برای تشخیص و بررسی اختلالات تیروئیدی، بسیار مفید بوده و معمولا از آزمون های ria و elisa برای این منظور می شود. با توجه به اینکه زنجیره آلفا بین tsh و سه هورمون گلیکوپروتئینی lh, fsh و cg شباهت ساختمانی زیادی وجود دارد؛ بنابراین،

  • تکثیر ،کلونینگ و بیان ژن نوترکیب bp26( omp28 )باکتری B‏. Melitensisجدا شده از استان مرکزی و تخلیص پروتئین BP26

    مقاله۲۰۱۲فصلنامه دامپزشکی و آزمایشگاهمریم عزیزپور مغوان1،سید داود حسینی*2، حسین بصیری3، ندا اکبری 3، میترا نظام آبادی4 ، صابر اسکندری5، محسن ساریخانی6

    مقدمه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده ای است که و هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می کند . بنابراین استفاده از بهترین ، دقیق ترین و به صرفه ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می باشد . عامل شایع بروسلوز در ایران B. melitensis بوده و پروتئین BP26 این باکتری خاصیت آنتی

  • تکثیر ،کلونینگ و بیان ژن نوترکیب bp۲۶( omp۲۸ )باکتری b‏. melitensisجدا شده از استان مرکزی و تخلیص پروتئین bp۲۶

    مقالهفصلنامه دامپزشکی و آزمایشگاهمریم عزیزپور مغوان1،سید داود حسینی2، حسین بصیری3، ندا اکبری 3، میترا نظام آبادی4 ، صابر اسکندری5، محسن ساریخانی6

    مقدمه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده ای است که و هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می کند . بنابراین استفاده از بهترین ، دقیق ترین و به صرفه ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می باشد . عامل شایع بروسلوز در ایران b. melitensis بوده و پروتئین bp26 این باکتری خاصیت آنتی

  • بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم a در باکتری اشریشیاکلی به عنوان کاندیدای تولید واکسن بوتولیسم

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی کردستانسید صفا علی فاطمی، seyed safa ali fatemi industrial and environmental biotechnology dept., national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb) tehran, iranگروه زیست فناوری صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران خیرا.. یاری، khairollah yari cell and molecular biology dept., medical biology research center, kermanshah university of medical sciences, kermanshah, iranگروه زیست شناسی سلولی و مولکولی، مرکز تحقیقات بیولوژی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه، کرمانشاه، ایران محمود تولائی، mahmood tavallaei biotechnology dept., genetic research center, baqiyatallah medical sciences university, tehran, iranگروه زیست فناوری، مرکز تحقیقات ژنتیک، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران دانیال کهریزی

    چکیده زمینه و هدف: بوتولیسم بیماری کشنده ای است که توسط نوروتوکسین یکی از هفت نوع کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. بخش کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ a(bont/a-hc)، از قابلیت بالایی در تحریک سیستم ایمنی برخوردار است که امروزه برای تولید واکسن نوترکیب ع