کلونینگ و بیان پروتئین a استافیلوکوکوس اورئوس در ecoli
چکیده
استافیلوکوکوس آرئوس یک باکتری کوکسی، گرم مثبت، کاتالاز مثبت، اکسیداز منفی، بیهوازی اختیاری و کوآگولاز مثبت است. این باکتری جزئی از فلور نرمال پوست و مخاط میباشد و بیش از 50 درصد افراد جامعه ناقلین استافیلوکوکوس آرئوس هستند. این باکتری میتواند منجر به عفونتهای متعددی در انسان، نظیر عفونتهای سطحی پوست همانند آبسه، زرد زخم شود. استئومیلیت، آرتریت عفونی و آندوکاردیت نیز موارد دیگر ناشی از عفونت با این باکتری در انسان محسوب میشوند. این ارگانیسم همچنین عفونتهایی را در حیوانات ایجاد میکند که ورم پستان استافیلوکوکی مهمترین آنها میباشد. عوامل متعددی در بیماریزایی استافیلوکوکوس آرئوس نقش دارند که پپتیدوگلیکان، اسید تیکوئیک ، کوآگولاز، کپسول، توکسینها و آنزیمهای ترشحی و پروتئین a استافیلوکوکوس آرئوس از مهمترین آنها محسوب میشوند. spa قسمت سطحی اغلب سویههای استافیلوکوکوس آرئوس را میپوشاند که با اتصالهای کووالانت به لایه پپتیدوگلیکان متصل میشود. پروتئین a در واقع بهعنوان یک فاکتور حدت برای استافیلوکوکوس آرئوس محسوب میگردد، زیرا با استفاده از این پروتئین، باکتری قادر میباشد ملکولهای igg چندین گونه حیوانی را از طریق قسمت fc به خود جذب کرده و ضمن فرار از پاسخ ایمنی، در برابر فاگوسیتوز نیز مقاومت نماید. وزن مولکولی این پروتئین 42000 دالتون میباشد و از 5 دومینa ،b ،c ،d ،e با قابلیت اتصال به ایمنوگلوبولینها به خصوص igg تشکیل شده است. اتصال پروتئین a میتواند از طریق پذیرنده fc(منطقه ثابت زنجیره سنگین مولکول igg که فعالیتهای بیولوژیکی آن را باعث میشود) و یا از طریق قسمت fab (منطقهای از igg که مسئول شناسایی آنتیژن است) صورت پذیرد. توانایی بالقوه و اتصال اختصاصی و انتخابی پروتئین a به تحت واحدهای ایمنوگلوبولین g باعث شده است که این پروتئین در موارد بسیاری در تکنیکهای کیفی و کمی ایمنولوژیکی مورد توجه محققین قرار گیرد. از واکنش پروتئین a با قسمت fab ایمونوگلوبولین g میتوان به منظور تهیه کونژوگه و استفاده در فعالیتهای ایمنولوژیکی مانند elisa و ria (رادیوایمونواسی)، ifa(ایمونوفلورسانس)، ایمنوهیستوشیمی، دات بلات و وسترن بلات استفاده نمود. همچنین از ویژگی اتصال spa به بخش fc آنتیبادی میتوان به طور گسترده در خالصسازی آنتیبادیهای مونوکلونال و پلیکلونال استفاده کرد. هدف از این تحقیق کلونینگ و بیان ژن سازنده spa در باکتری اشریشیاکلی و استفاده کاربردی این پروتئین در مطالعات آینده میباشد.